Purificación y caracterización electroforética de la proteína de unión a GH (GHBP) en suero humano y de pacientes con cáncer y en embarazo: evidencia de la exitencia de una proteína de unión a prolactina (PRLBP) / Purification and electrophoretic characterization of growth hormone binding protein (GHBP) in human, cancer and pregnancy sera: evidence of the presense of prolactin binding protein (PRLBP)

Una de las formas de regulación de la actividad de ciertas citocinas es la generación de formas solubles del receptor, las cuales actúan principalmente como proteínas de unión, aunque también se les han atribuido funciones de carácter agonista. El objetivo de este trabajo fue el de establecer la presencia de proteínas de unión a hormona de crecimiento (GHBP) y prolactina (PRLBP) en suero humano. La GHBP se purificó parcialmente mediante un nuevo método empleando hormona humana de crecimiento (GH, growth hormone) humana inmovilizada sobre Sepharosa y su separación y detección se realizó por medio de electroforesis e inmunotransferencia (Western blot), utilizando un anticuerpo dirigido contra el receptor de GH. Los resultados mostraron que la GHBP de suero humano es una mezcla compleja de proteínas con pesos en el rango de 27 a 62 kDa, relacionadas estructuralmente con el receptor de GH y cuyo origen está por determinarse. El suero proveniente de pacientes con cáncer de seno en estados 3 y 4, así como el de embarazo, mostró el mismo perfil de proteínas aunque sus niveles fueron en todos los casos inferiores a la normalidad, siendo los más bajos los de embarazo. En cuanto a la PRLBP, mediante anticuerpos antirreceptor, se identificó una proteína sérica de 150 kDa disociable en dos subunidades de pesos 50 y 30 kDa, consiste con lo informado por otros autores. De acuerdo con el peso establecido y a su incapacidad para unir hGh, se concluyó que no es una forma soluble del receptor y se sugiere que puede ser un anticuerpo antiidiotípico presente en el suero humano. No se encontraron diferencias en el perfil ni el contenido de las PRLBP en los tres tipos de suero analizados. Los resultados obtenidos ponen en evidencia la exitencia de una proteína de unión a prolactina relacionada con el receptor de PRL y cuyo origen en humanos está por establecerse

Isolation and identification of actin-binding proteins in Plasmodium falciparum by affinity chromatography

The invasion of the erythrocyte by Plasmodium falciparum depends on the ability of the merozoite to move through the membrane invagination. This ability is probably mediated by actin dependent motors. Using affinity columns with G-actin and F-actin we isolated actin binding proteins from the parasite. By immunoblotting and immunoprecipitation with specific antibodies we identified the presence of tropomyosin, myosin, a-actinin, and two different actins in the eluate corresponding to F-actin binding proteins. In addition to these, a 240-260 kDa doublet, different in size from the erythrocyte spectrin, reacted with an antibody against human spectrin. All the above mentioned proteins were metabolically radiolabeled when the parasite was cultured with 35S-methionine. The presence of these proteins in P. falciparum is indicative of a complex cytoskeleton and supports the proposed role for an actin-myosin motor during invasion.

Proteínas de unión a actina en Plasmodium falciparum

La invasión del Plasmodium falciparaum, el agente causante de la malaria en humanos, implica un movimiento de penetración del parásito a los eritrocitos. Con el objetivo de determinar proteínas de unión a actina, se utilizaron dos estrategias diferentes: la primera consistió en preparar columnas de afinidad con actina polimerizada (actina F), para cromatografiar extractos de parásito marcados radioactivamente con L-[Superíndice 35S] metionina, y seleccionar proteínas de unión a actina que posteriormente, fueron identificadas por medio de anticuerpos específicos. En la segunda se utilizó la Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) y oligonucleótidos generados, diseñados con base en secuencias consenso de miosinas, para buscar un fragmento de este gen en el ADN genómico (ADNg) del parásito y posteriormente clonarlo y secuenciarlo. Los resultados obtenidos sugieren la existencia de un motor molecular basado en actina-miosina, en la invasión del parásito a los eritrocitos. Esta afirmación esta sustentanda en primer lugar por el hallazgo de un gen de miosina en P. falciparum, que por homología de su secuencia parcial se clasifica dentro de la clase I de las miosinas no convencionales, caracterizadas por su capacidad de generar movimientos sobre filamentos de actina en diferentes células. Adicionalmente por medio de Western Blot y anticuerpos específicos, anti alfa actina, tripomiosina, espectrina, miosina y actina se determinó la exitencia de estas proteínas en el parásito